Principal Artículos          

Rev Med IMSS (Mex) 1998; Volumen 36(5): 349-352

 

APORTACIONES CLINICAS

 

Confirmación de la infección por VIH mediante prueba cualitativa

de amplificación de ácidos nucleicos

 

GUSTAVO BARRIGA ANGULO

 NOHEMI PATRICIA CASTILLO TORRES

CARLOS ARUMIR ESCORZA

MARGARITA SOLIS TREJO

 

Laboratorio Clínico, Hospital de Infectología, Centro Médico Nacional La Raza, Distrito

Federal, México.

 

RESUMEN

 

En el diagnóstico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) los resultados falsos negativos o falsos positivos de ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) y la prueba de Western-Blot constituyen un problema clínico frecuente. Por tal motivo, se decidió evaluar una prueba cualitativa de amplificación del ácido nucleico del VIH-1 (NASBAMR) en 69 pacientes con resultados serológicos discordantes con los datos clínicos. Mostraron positividad a esta prueba 22 pacientes en quienes se identificaron más factores de riesgo a la infección por VIH y cuyas pruebas de Western-Blot mostraban bandas a la fracción ENV. Los pacientes con resultado negativo carecían de factores de riesgo y la prueba Western-Blot indicaba bandas no virales o sólo en la fracción GAG. La prueba cualitativa NASBA mostró ser un procedimiento específico de gran utilidad en el diagnóstico etiológico de la infección por VIH-1.

 PALABRAS CLAVE: VIH-1, seronegatividad al VIH, seropositividad al VHI, anticuerpos al VIH, amplificación de ácidos nucleicos del VIH-1  

SUMMARY  

False positive and negative results on EIA and indeterminate Western-Blot for the diagnosis of HIV infection are a significant and frequent clinical problem, for that reason we decided to evaluate a qualitative ARN HIV-1 plasmatic test (NASBA Q T)TM in 69 patients with discordant clinical and serological results. 22 patients were positive with the NASBA test; the NASBA results were consistent with the confirmatory results and clinical outcome, NASBA positive patients were more often identified with risk factors, for HIV infection and showed ENV on the Western-Blot, NASBA negative patients were less often identified with risk factors and commonly displayed GAG only or non viral bands on the Western-Blot. The qualitative NASBA technique was a specific and very useful method in the etiological diagnosis of HIV-1 infection. 

KEY WORDS: HIV-1, HIV seronegativity, HIV seropositivity, HIV antibodies, nucleic acid amplification HIV-1  

Introducción  

Generalmente el diagnóstico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) se establece cuando una muestra de suero es repetidamente reactiva a una prueba inmunoenzimática y a una de referencia más específica como la de Western-Blot o inmunofluorescencia. 1 Dependiendo de la prueba inmunoenzimática utilizada, numerosas muestras repetidamente positivas resultan indeterminadas en las pruebas de referencia. En su mayoría pertenecen a individuos no infectados por VIH-1, sin embargo, 1 a 5 % de ellas corresponde a individuos que están en proceso de seroconversión, en fases terminales de la infección o a hijos de madres seropositivas.

En ocasiones existen individuos con datos clínicos de infección por VIH-1 y resultados negativos de ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) y Western-Blot. 2,3  

La introducción de nuevas generaciones de ELISA con mayor sensibilidad que las anteriores han aumentado este problema. 4 Las características actuales de las mal llamadas pruebas confirmatorias, como la de Western-Blot, las hacen inadecuadas para este fin, siendo imposible distinguir entre los resultados indeterminados debidos a reacciones falsas positivas de los originados por una reacción positiva, por lo que se requiere de pruebas más específicas. 5 En este trabajo se presentan los hallazgos obtenidos en 69 pacientes con datos clínicos, epidemiológicos o serológicos no determinantes de infección por VIH-1 en los que se utilizó una prueba cualitativa de amplificación del ácido nucleico de dicho virus (NASBA). MR

 

Material y métodos

 Se estudiaron 69 pacientes que habían sido referidos al Hospital de Infectología, Centro Médico Nacional La Raza, por mostrar resultados de pruebas serológicas de tamiz (ELISA) y confirmatorias (Western-Blot) para el virus de la inmunodeficiencia humana discordantes con los datos clínicos y epidemiológicos. Fueron clasificados en tres categorías:

 • Grupo 1: 45 pacientes sin datos clínicos o epidemiológicos de infección por VIH-1; ELISA repetidamente positiva y prueba de Western-Blot negativa o indeterminada.

• Grupo 2: 11 niños nacidos de madres infectadas con VIH-1; ELISA y prueba de Western-Blot repetidamente positivas.

• Grupo 3: 13 pacientes con datos clínicos o epidemiológicos de infección por VIH; ELISA y prueba de Western-Blot repetidamente negativas.

A todos se les tomó muestra de sangre total utilizando EDTA como anticoagulante; el plasma fue separado por centrifugación y conservado a -70° C hasta su procesamiento. Las muestras fueron sometidas a prueba cualitativa de amplificación de ácido nucleico del VIH-1 (NASBA) MR.6 Esta prueba se basa en la actividad simultánea de tres enzimas: transcriptasa inversa, RNAS a y T7 ARN polimerasa. La reacción de amplificación del ácido nucleico se inicia mezclando todos los reactivos excepto las enzimas, seguida de incubación a 65° C durante cinco minutos para desnaturalizar cualquier estructura secundaria; posteriormente se agregan las enzimas y nuevamente se incuba durante 90 minutos a 41° C. El producto de la reacción es un ácido nucleico de una sola tira que representa una amplificación de 106 a 109 de la secuencia original del blanco, detectado por hibridización líquida con sondas de oligonucleótidos de secuencia específica marcados con peroxidasa seguido de electroforesis en gel y tinción directa de las bandas con tetrametil benzidina (figura 1). La reacción se consideró positiva cuando se obtuvieron bandas similares a las de los controles.

 

Figura 1. Prueba cualitativa NASBA O.T. TM

 

Resultados  

De los pacientes estudiados 53 (77 %) correspondieron al sexo masculino y 16 (23 %) al femenino; 17 (25 %) eran niños y 52 (75 %) adultos. La distribución por grupos de edad se puede observar en el cuadro I.

 

Cuadro I

 

Distribución por edad y sexo de 69 pacientes con resultados de pruebas serológicas de tamiz y confirmatorias para VIH discordante

 

 

 

 

 

 

Edad (años)

Masculino

Femenino

Total

 

 

 

 

 

 

<1

3

5

 

8

1 a 4

3

4

 

7

5 a 14

1

1

 

2

15 a 24

3

1

 

4

25 a 44

42

5

 

47

45 a 64

1

0

 

1

>65

0

0

 

0

 

 

 

 

 

Total

53

16

 

69

Del total de pacientes 22 (32 %) mostraron positividad a NASBA; en ellos se identificaron datos clínicos y epidemiológicos de infección por VIH-1 y bandas a la fracción ENV en la prueba de Western-Blot. Los 47 restantes (68 %) con resultado negativo a NASBA mostraron bandas no virales o sólo a la fracción GAG en la prueba de Western-Blot y carecían de datos clínicos y epidemiológicos de infección por VIH-1(cuadro II).

Cuadro ll

 

Resultados de NASBA en 69 pacientes con pruebas serológicas de tamiz y  

confirmatorias para VIH discordantes  

Grupo              Pacientes           NASBA

 

Núm.                        +                      /

 

 

1                              45                11/34

 

2                             13                  8/5

 

3                             11                 3/8

 

Total                      69              22/47

 

Grupo 1: sin datos de infección por VlH-1 ELISA positiva y prueba de Westem-Blot

Grupo 1: sin datos de infección por VlH-1 ELISA positiva y prueba de Westem-Blot negativa o indeterminada.

Grupo 2: hijos de madres infectadas Con VIH-1; ELISA y prueba de Westem-Blot positivas.

Gripo 3: con datos de infección por VIH; ELISA y prueba de Westem-Blot negativas.

 NASBA = prueba cualitativa de amplificación del ácido nucleico del VHI- 1

 

Comentarios y discusión

 

La realización cada vez más frecuente de pruebas para determinar anticuerpos VIH 1/2 con fines diagnósticos, epidemiológicos y en el escrutinio de donadores de sangre, órganos y tejidos, aunada a la aparición de nuevas pruebas inmunoenzimáticas de mayor sensibilidad, 5-7 ha incrementado el número de personas que muestran reacciones falsas positivas de anticuerpos a dicho virus. 2 Por otra parte, en ocasiones la respuesta inmune al VIH es más lenta comparada con otras infecciones y origina que la identificación de los anticuerpos se retrase hasta por varias semanas (periodo de ventana). 8,9 En algunos pacientes infectados por el virus la depresión de la inmunidad puede ser tan severa que no sea posible detectar anticuerpos, generando reacciones falsas negativas; 10 es por ello que se requiere de pruebas más específicas que ayuden a distinguir las reacciones falsas positivas o falsas negativas. Desafortunadamente las pruebas de mayor especificidad como la de Western-Blot, a diferencia de las inmunoenzimáticas (ELISA), no están diseñadas para detectar anticuerpos de tipo IgA o IgM, mostrando también reacciones falsas positivas, falsas negativas o resultados indeterminados. 11  

Los resultados falsos positivos han sido asociados con estimulación policlonal de células debida a inmunizaciones o infecciones, las cuales generan anticuerpos que reaccionan de manera cruzada con epítopes del VIH-1 o con proteínas celulares, tal es el caso de los anticuerpos a los antígenos HLA-DR4 y los autoanticuerpos con reacción cruzada a determinantes celulares normales de células H9 o CEM, donde el VIH-1 es cultivado para obtener las proteínas utilizadas en algunas pruebas de Western-Blot. 12-16

La transferencia pasiva de anticuerpos al VIH-1 a través de la placenta a niños nacidos de madres infectadas ocasiona durante meses un resultado positivo en las pruebas inmuno-enzimáticas y en la de Western-Blot, a pesar de no estar infectados.  

En este estudio la prueba cualitativa de amplificación de ácidos nucleicos del VIH-1 (NASBA) fue de gran utilidad al permitir dilucidar que únicamente 11 de los 43 pacientes con ELISA repetidamente positiva y prueba de Western-Blot indeterminada eran realmente positivos, que tres de los once niños nacidos de madres seropositivas se habían infectado intrauterinamente y ocho de los 13 pacientes con sintomatología clínica de sida y serología negativa estaban realmente infectados.  

REFERENCIAS  

1. Recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/ Weekly Epidemiol Rec 1992;20:145-149.

2. Celum CL, Coombs RW, Jones M, Murphy V, Fisher L, Holmes RR. Risk factors for repeatedly reactive HIV-1 EIA and indeterminate Western-Blot. Arch Intern Med 1994;154:1129-1137.

3. Stramer SL, Heller JS, Coombs RW, Parry JV, Ho DD, Allain JP. Markers of HIV infection prior to IgG. JAMA 1989;262: 64-69.

4. Gallarda JL, Heurard DL, Liu D, Harrington A, Atramer AL, Valinsky JE, Wu P. Early detection of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 by using an antigen conjugate immunoassay correlates with the presence of immunoglobulin M antibody. J Clin Microbiol 1992;30:2379-2384.

5. Van Ker Chhoyen L, Vercouteren G, Piot P, Van der Groeng. Comparative evaluation of 36 commercial assays for detecting antibodies to HIV. Bull WHO 1991;69:753-760.

6. Van Gemen B, Kievits T, Nava P, Hursnan HG, Goldsmit J, Lens P. Qualitative and quantitative detection of HIV-1 RNA by nucleic acid sequence based amplification. AIDS 1993;(7)S-2:107-110.  

7. Centers for Disease Control. Semen, banking, organ and tissue transplantation, and HIV antibody testing. MMWWR 1988;37:57-58, 63.

8. Walinsky SM, Rinaldo CR, Kowk S. Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection a median of 18 months before a diagnostic Western-Blot: evidence a from a cohort of homosexual men. Ann Intern Med 1989;111,968-972.

9. Horsburgh CR, Ou CY, Jason J. Duration of human immunodeficiency virus infection before detection of antibody. Lancet 1989;2:637-640.

10. Loche M, Mach B. Identification of HIV-1 infected seronegative individuals by a direct diagnostic test based on hybridization to amplified viral DNA. Lancet 1988;2:418-421.

11. Celum CL, Coombs RW, Lafferty W. Indeterminate human immunodeficiency virus type 1 Western-Blot seroconversion risk, specificity of supplemented tests and an algorithm for evaluation. J Infect Dis 1991;164:650-664.

12. Schnittman SM, Lane HC, Higgins SE, Fulks T, Fauci AS. Direct polyclonal activation of human B lymphocytes by the acquired immunodeficiency virus. Science 1986;233:1084-1086

13. Mackenzie WB, Davis JD, Peterson DE. Multiple false-positive serologic tests for HIV, HTLV-1, and hepatitis following influenza vaccination. JAMA 1992;268:1015-1017.

14. Jackson JB, MacDonald KL, Cadwell J. Absence of HIV infection in blood donors with indeterminate Western-Blot tests for antibody to HIV-1. N Engl J Med 1990;322:217-222.

15. Kleinman S. The significance of HIV-1 indeterminate Western-Blot results in blood donor populations. Arch Pathol Lab Med 1990;114: 298-303.

16. Dock NL, Klienman SH, Rayfield MA. Status of human immunodeficiency virus infection in individuals with persistently indeterminate Western-Blot patterns; prospective studies in a low prevalence population. Arch Intern Med 1991;1510:525-530.

17. Nair P, Alger L, Hines S. Maternal and neonatal characteristics associated with HIV infection in infants of seropositive women. J Acquir Immuno Defic Syndr 1993;6:298302.

 

 

 

 
   
 
   
 
 
   

 

Envíe un mensaje a Asociación Monarcas México A.C. con preguntas o comentarios sobre este sitio Web.
Copyright © 2006 Asociación Monarcas México A.C.
Última modificación: 26 de Octubre de 2010 09:37:27 a.m.


Copyright © 2006-2007 Asociación Monarcas México A.C. Derechos Reservados.